普瑞瑪“實驗動物模型與藥物評價”專欄十 | 大鼠真菌性中耳炎模型建立來源:普瑞瑪 時間:2023-11-02 14:34:55 瀏覽:616
中耳炎是發生在中耳組織結構中的炎性病變,分為分泌性中耳炎、化膿性中耳炎、中耳膽脂瘤和特殊類型中耳炎4大類,該病不僅可導致注意力、認知感和聽力下降,還可引起顱內外并發癥進而危及生命[1-3]。 近年來,隨著臨床上糖皮質激素和廣譜抗菌藥物的普遍使用,條件致病菌感染率不斷增加,真菌檢出率逐漸升高,真菌性中耳炎逐漸走入大眾視野[4]。
1.真菌性中耳炎 真菌性中耳炎是以真菌為致病菌的中耳炎性疾病,《中耳炎臨床分類和手術分型指南(2012)》首次出現這一分類,并將其歸屬至特殊類型中耳炎[3]。其與慢性化膿性中耳炎的臨床癥狀極其相似,常被誤診為普通細菌性中耳炎,對其進行抗生素治療,而廣譜抗生素會抑制細菌簇,使真菌迅速繁殖,加重病情,為臨床診治帶來困難[5,6]。
2.造模方式 SD大鼠50只,雌雄各半,隨機分為正常對照組、空白注射組、潮濕組、免疫抑制組和潮濕+免疫抑制組,每組10只。 實驗開始1 ~ 3 d,潮濕組每日對大鼠右側耳部滴入2次0.9%氯化鈉注射液,免疫抑制組每日經口灌胃給予醋酸地塞米松藥液,潮濕+免疫抑制組每日對大鼠右側耳部滴入兩次0.9%氯化鈉注射液的同時每日經口灌胃給予醋酸地塞米松藥液。 第4天,各組麻醉后,潮濕組、免疫抑制組和潮濕+免疫抑制組將1×1010 CFU/mL白色念珠菌懸液經鼓膜穿刺注入到大鼠右側中耳腔,每只50 μL,空白注射組大鼠注入等體積空白培養液,正常對照組不做任何處理;每日對潮濕組、潮濕+免疫抑制組大鼠右側耳部滴入2次0.9%氯化鈉注射液,連續觀察15天。
3.不同時間大鼠中耳白色念珠菌定植變化 取大鼠耳道分泌物進行菌種培養并確認菌種定植,白色念球菌注入后的第5天、第10天、第15天,正常對照組和空白注射組大鼠耳道分泌物培養鑒定均無明顯菌落生長;潮濕組、免疫抑制組和潮濕+免疫抑制組的大鼠耳道分泌物經培養鑒定均為白色念珠菌且沒有發現其他菌落,培養的白色念珠菌呈呈乳白色,表面光滑有濃酵母氣味,形成菌落。 大鼠耳道分泌物經過革蘭氏染色后,可見成群革蘭染色陽性的卵圓形孢子和假菌絲。如圖3所示,造模后的第5、10和15天中,潮濕+免疫抑制組大鼠耳道分泌物染色均出現白色念珠菌,且隨著時間的延長而增加;而免疫抑制組和潮濕組大鼠的耳道分泌物中均發現白色念珠菌,隨著時間延長,白色念球菌數量逐漸減少。
(一般培養法)
(革蘭氏染色法)
4.不同時間大鼠大鼠中耳病理變化 大鼠中耳HE染色結果所示,正常對照組和空白注射組大鼠在潮濕組(白念)大鼠中耳黏膜有充血、出血、水腫、少量炎性細胞浸潤現象;在免疫抑制組(白念)大鼠中耳出現黏膜充血、水腫、大量炎性細胞浸潤;在潮濕+免疫抑制組(白念)大鼠中耳黏膜充血、水腫、大量炎性細胞浸潤。
5.注意事項 綜合實驗結果可清晰發現白色念珠菌在潮濕+免疫抑制條件下的模型建立方面效果更佳,提示兩方面因素:一方面是由于白色念珠菌屬于機會性和致病性真菌,在機體免疫功能低下時引起淺表感染和侵襲性感染的頻率更高;另一方面是由于白色念珠菌在干燥環境的存活率很差,而在潮濕環境中存活時間更長。
6.參考文獻 [1]Wald ER, DeMuri GP. Antibiotic recommendations for acute otitis media and acute bacterial sinusitis: conundrum no more [J]. Pediatr Infect Dis J, 2018, 37(12): 1255-1257. [2]肖聰聰, 李博, 鄭體花, 等. 中耳炎小鼠模型的聽力學特點 [J]. 中國老年學雜志, 2019, 39(22): 5581-5585. [3]孫建軍, 劉陽. 中耳炎臨床分類和手術分型指南(2012)解讀 [J]. 中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志, 2013, 48(1): 5. [4]周詳, 謝鼎俊, 姜順民, 等. 聚維酮碘治療化膿性中耳炎真菌感染及對聽力影響研究 [J]. 中華醫院感染學雜志, 2019, 29(14): 2194-2197, 2211. [5]劉明賀. 真菌性中耳炎及相關變應原研究 [D]. 荊州: 長江大學; 2017. [6]曾勇超. 真菌性中耳炎的發病危險因素分析與護理干預對策 [J]. 護理實踐與研究, 2019, 16(5): 97-98.
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